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作为神圣罗马帝国皇帝，查理于1521年召集马丁·路德前往沃尔姆斯议会，并承诺给予他安全通行的保证条件。
路德出席后，为《九十五条论纲》和他的着作进行了辩护。
查理评论道：“那个修士永远不会让我变成异端。”
查理五世依靠宗教统一来治理他各个不同的领土，因为这些领土只有通过他的个人统治才得以统一，因此他将路德的教义视为一种具有破坏性的异端。
他将路德宣布为不法之徒，并发布《沃尔姆斯敕令》，声明：
“你们知道，我是伟大的德意志民族的最虔诚皇帝、天主教西班牙国王、奥地利大公和勃艮第公爵的后裔。
他们一生都忠实于罗马教会……在他们去世后，按照自然法和继承法，他们将这些神圣的天主教仪式传给了我们，让我们遵循他们的榜样生活并死去。
所以，直到现在，我一直是我们祖先的忠实追随者。因此，我决心维持这些我祖先所建立的制度，直至今日。”
然而，查理五世信守承诺，允许马丁·路德自由离开这座城市。
萨克森选侯兼路德的保护者腓特烈三世对沃尔姆斯议会的结果感到遗憾。
在从沃尔姆斯返回的途中，路德被腓特烈的手下绑架，并被藏在远处的瓦尔特堡。
在那里，他开始进行圣经的德语翻译工作。
路德宗的传播导致了两场主要的起义：1522-1523年的骑士起义和1524-1525年由托马斯·闵采尔领导的农民起义。
尽管支持帝国的施瓦本同盟与害怕社会动乱的新教诸侯联手恢复了秩序，查理五世还是通过赦免的方式维持了和平。
在此之后，查理五世采取了宽容的态度，开始追求与路德宗的和解政策。
1530年的奥格斯堡帝国议会是查理五世召集的，旨在讨论三个问题：
首先是对抗奥斯曼威胁的帝国防御；
其次是与政策、货币和公共福利相关的问题；
第三是基督教的分歧，试图达成某种妥协并处理德国的局势。
议会由皇帝于6月20日正式开启。
会议产生了许多成果，其中最为重要的是1530年由路德宗诸侯提出的奥格斯堡信纲（Confessio Augustana），这是路德宗的核心文件。
路德的助手菲利普·梅兰希通更进一步，亲自将信纲提交给查理五世
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